苏州微流纳米生物技术有限公司

Suzhou Will NanoBioTech Co.,Ltd.
咨询热线: 13020218906  邮箱: biotech@willnano.com
资讯动态 首页 > 资讯中心 > 技术日志

升麻素脂质体的制备与分析

作者:www.willnano.com 日期:2019-10-05 点击:58
一键分享

升麻为毛茛科植物大三叶升麻,兴安升麻或升麻的干燥根茎。具有清热解毒升举阳气的功效。临床上用于治疗风热头痛、咽喉肿痛、子宫脱垂等症,升麻在近年来的研究中也被发现有良好的抗肿瘤活性。升麻素就是其中的色原酮类成分。

脂质体是巨噬细胞的天然吞噬对象之一。脂质体进入血液循环后,主要被网状内皮系统(RES)吞噬而被动靶向于RES,包括肝、脾、肺等组织,称为被动靶向。中医药在治疗癌症等疑难病症有较大的优势。脂质体在药物中的应用受到了广泛的关注,取得了很大的成果,有紫杉醇、多柔比星、两性霉素等脂质体面世。将升麻素与脂质体的结合起来,为中药成分使用和研究开辟了新思路。

本文将简介升麻素脂质体制备,并对其表征结构进行分析。


实验仪器:
Agilent1100高效液相色谱仪,美国Agilent公司;
超声仪(KQ5200B),昆山市超声仪器有限公司;
电子天平,Sartorius公司(赛多利斯);
离心机(Sigma3K15),SIGMA 公司;
脂质体挤出器(Genizer HandExtruder-1ml-RT, 苏州微流纳米);
激光光散射仪(BrookhavenInc,Holtsvile,NY);布鲁克海文/Brookhaven。


1ml-手动型脂质体挤出器.png

Genizer 手动型脂质体挤出器

实验试剂:
大豆卵磷脂;
胆固醇(cholesterol(ovinewool)(>98%);
甲醇;
三氯甲烷;
升麻素,对照品上海诗丹德生物技术有限公司,批号ST00030120MGPBS缓冲液1x,北京博奥拓达科技有限公司;
聚碳酸酯膜(Nuclepore),Whatman公司。


实验步骤:
升麻素脂质体的制备
采用薄膜挤出法制备升麻素脂质体:精密称取大豆卵磷脂11.31mg、胆固醇11.61mg和升麻素三氯甲烷溶液5mL(含升麻素1.176mg),溶解于50mL磨口梨形瓶中,并加入四氟球若干,45℃水浴中减压旋蒸以除去三氯甲烷,形成均匀透明的薄膜,油
泵抽真空过夜。在蒸发得到的类脂膜中加入PBS缓冲液3mL,水浴45℃水浴常压旋转30min,超声处理1min,继续水浴旋转20min,使膜充分溶胀水合。水合得到的脂质体混悬、液过100nm 的聚碳酸酯膜,经手动型脂质体挤出器往返挤压21次,制得升麻素脂质体。


制备检测结果:
1)升麻素脂质体的制备

实验制得乳白色升麻素脂质体3mL,均匀无沉淀,激光笔照射示有丁达尔现象。

2)脂质体包封率测定方法建立

绘制升麻素标准品标准曲线,结果如图1和表1所示,制得升麻素HPLC标准曲线线性良好。

 升麻素HPLC标准曲线图

图1 升麻素HPLC标准曲线图


升麻素HPLC标准曲线表

表1 升麻素HPLC标准曲线表

实验测得样品保留时间为14.648min,与标准品保留时间一致,样品峰面积为698.53131。代入标准曲线得包封率为86.49%。

3)载药脂质体的粒径测定结果见图2。

载药脂质体粒径为73.93nm,且粒径分布也比较窄,样品PdI为0.347.说明体系中的样品很均匀。

脂质体粒径分布

图2 脂质体粒径分布

4)载药脂质体的稳定性考察

载药脂质体在冰箱中放置时间为一周时取出,外观颜色均匀,底部没有沉淀,粒径检测如图3所示,放置两周后取出,外观依旧颜色均匀,底部并无沉淀产生,粒径检测如图4所示。所制脂质体在两周内外观和粒径均非常稳定。

保存一周脂质体粒径分布图

图3 保存一周脂质体粒径分布图


保存两周脂质体粒径分布图

图4 保存两周脂质体粒径分布图


结论:

本实验通过经典薄膜-挤出法制备了升麻素脂质体,这种l利用脂质体挤出器的制备方法相对成熟、简单,粒径分布良好,过程相对可控,为脂质体制备的主要方法之一。挤出时通过手动型脂质体挤出器往返挤出21次,通过薄膜孔径控制制得脂质体的粒径,制得的脂质体粒径更容易控制。

实验成功制得升麻素脂质体,建立简单快速测量其包封率的方法并对其粒径这一微曲形态进行了分析。制得升麻素包封率为86.49%,平均粒径为73.93nm,PdI为0.347,符合设计要求,且分布较窄,4℃下储藏稳定性好,为进一步研究升麻素脂质体的性质提供了很好的铺垫。



苏州微流纳米Vic 上传

上一条:微射流高压均质机工作原理与特性介绍

下一条:微射流高压均质机在化妆品纳米乳制备中的应用举例