脂质体主要由磷脂和胆固醇组成，是两亲性分子的集合，粒径、电荷、成分和分子结构容易控制，且可生物降解，免疫原性小、无毒；可包载水溶性和脂溶性药物，使药物缓慢释放；脂质体通过细胞的内吞和融合作用，直接将药物送入细胞内，减少不良反应，因此脂质体是较理想的靶向载药体系。近年来随着生物科学技术的不断发展，脂质体的制备工艺逐步完善,脂质体具有优良的生物相容性、靶向性、长效缓释性、低毒性等优点,能提高药物的稳定性和治疗指数并且降低药物毒性，因此,脂质体作为药物载体的研究越来越受到重视,且取得了可喜的进展。目前已有紫杉醇脂质体上市，如南京绿叶思科公司的注射用紫杉醇脂质体和美国AbraxisBioScience公司的注射用紫杉醇(白蛋白结合型)；德国Medigene公司研制的代号为EndoTAG-1的紫杉醇脂质体和美国的Neopharm公司研制的代号为LEP-ETU的紫杉醇脂质体正处于临床研究阶段。

肝癌是世界上较常见的恶性肿瘤之一，死亡率居恶性肿瘤的第3位，仅次于胃癌和食管癌。现代综合治疗方法常限制在放、化疗和免疫治疗上，但是放、化疗对肝癌的治疗毒副反应极大，适应证减少，疗效也差。寻找治疗癌症的新方法和新途径是目前亟需解决的问题。将抗癌药物研制成靶向给药系统，从技术上可将药物特异性的输送、浓集于靶区病变部位，提高药效，降低毒副作用。

本研究目的是将一种光谱抗癌的生物碱A利用高压微射流技术制备成粒径为100-200nm的脂质体，生物碱A是具有明确抗肿瘤作用的中药活性物质，但由于其水溶性极差，生物利用度低，限制了其在临床的应用，而制成脂质体后的剂型，通过血液循环蓄积于肝脏，达到靶向治疗肝癌的作用。将生物碱A包封在脂质体内，可显著增加药物的稳定性，降低毒副作用，增加生物利用度，达到靶向缓释的作用。

本文将简介生物碱A脂质体处方优化过程

实验设备：

1260型高效液相

电子天平

旋转蒸发器

激光粒度分析仪

微射流高压均质机

实验方法：

初乳制备方法的筛选

（1）薄膜分散法

精密称取生物碱A 10mg、磷脂500mg、胆固醇40mg、VE40mg，加入氯仿使其溶解，过滤后转移至250mL茄形瓶中，40℃水浴条件下减压蒸发除去有机溶剂，至瓶壁上形成均匀的脂质薄膜，用氮气去除残留溶剂。加入15mLPBS（pH7.0）和玻璃珠，35℃水浴条件下旋转水合，直至薄膜脱落溶解，得生物碱A脂质体粗悬液，声后经高压微射流仪均质处理，即得生物碱A纳米脂质体。

（2）逆相蒸发法

精密称取生物碱A 10mg、磷脂500mg、胆固醇40mg、VE40mg溶于乙醚中，过滤后加入适量PBS（pH7.0）缓冲液声，直至形成比较稳定的W/O型乳液，减压蒸发除去乙醚使之处于胶态后，加入PBS缓冲液水化使凝胶脱落，继续减压蒸发，制得水性混悬液，声后经高压微射流均质处理即得生物碱A纳米脂质体。

（3）乙醇注入法

精密称取生物碱A 10mg、磷脂500mg、胆固醇40mg、VE40mg溶于乙醇中，过滤去除少量不溶性成分，缓慢注入60℃的PBS缓冲液中，磁力搅拌下挥尽乙醇，声，经高压微射流均质处理即得生物碱A纳米脂质体。

（4）乙醚注入法

精密称取生物碱A 10mg、磷脂500mg、胆固醇40mg、VE40mg溶于乙醚中，过滤去除少量不溶性成分，缓慢注入40℃的PBS缓冲液中，磁力搅拌下挥尽乙醚，声，经高压微射流均质处理即得生物碱A纳米脂质体。

根据脂质体悬液的性质，设定以下几个指标来考察工艺的好坏：①粒径大小：依次经0.8µm、0.45µm的微孔滤膜过滤应无很大阻力，且滤膜上药物应残留少，过滤液与原液外观无很大差异，药物含量应该与实际投药量的比率高；②稳定性：放置24h，脂质体悬液应稳定，底部无沉淀；③包封率应较高。用上述四种方法分别制备3批脂质体，测定包封率，结果见表1

表1不同制备方法评价

由结果可知，四种方法制备的脂质体质量差异较大，薄膜分散法制得的脂质体包封率可高达，粒径符合要求，稳定性较好，跟其他三种方法相比具有明显的优势；而且薄膜分散法应用较为广泛，尤其适用于包封脂溶性药物，设备易得、操作简单，因此采用薄膜分散法制备生物碱A脂质体。

单因素考察

有机溶剂筛选

精密称取生物碱A 10mg、磷脂500mg、胆固醇40mg、VE40mg,分别用甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙醚、氯仿充分溶解，成膜温度为40℃，pH7.0的PBS缓冲液制备脂质体，以包封率、脂质膜的形成时间和均匀度为考察指标，筛选有机溶剂。结果见表2。

表2不同溶剂对脂质体包封率的影响

由结果可知，甲醇、乙醇制备的脂质体包封率较低，且制备过程中磷脂不易溶于甲醇和乙醇，需要声，且需要较高的水浴温度才能除尽乙醇，可能导致磷脂氧化，脂质膜部分颜色发黄。相比甲醇、乙醇、二氯甲烷，用氯仿和乙醚制备的脂质体有较高的包封率，但是考虑氯仿毒性较乙醚大，乙醚极易挥发，旋蒸易得到光滑的脂质薄膜，故确定乙醚作为有机溶剂。

成膜温度考察

精密称取生物碱A 10mg、磷脂500mg、胆固醇40mg、VE40mg，用乙醚充分溶解，考察温度为30℃、35℃、40℃、45℃时，pH7.0的PBS缓冲液制备脂质体，以包封率、脂质膜的形成时间和均匀度为考察指标，筛选成膜温度。结果见表3。

表3不同成膜温度对脂质体包封率的影响

 由结果可知，当成膜温度为45℃时，乙醚挥发较快，导致磷脂膜起泡，脂质膜的质量较差，而且高温会加速磷脂的氧化，导致包封率降低；成膜温度为35℃时，成膜速度适中，脂质膜均匀、透明，包封率较高，较终确定成膜温度为35℃。

PBS缓冲液的pH

精密称取生物碱A 10mg、磷脂500mg、胆固醇40mg、VE40mg，用乙醚充分溶解，成膜温度为35℃，分别用pH为6.5、7.0、7.4的PBS缓冲液制备脂质体，以洗膜时间、稳定性和包封率为考察指标,确定pH。结果见表4。

表4PBS缓冲液的pH考察

PBS缓冲液的pH不同导致药物带电量不同，从而影响脂质体表面药物的吸附量、脂质体的表面电动电位以及稳定性，由结果可知，pH7.4的PBS缓冲液制备脂质体时，28min即洗膜完全，可以防止磷脂氧化并且缩短实验周期，制得的脂质体放置24h稳定，包封率较高，较终确定PBS缓冲液的pH为7.4。

磷脂与药物的质量比考察

固定上述条件不变,比较磷脂(W1)与药物(W2)的质量比为15:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、45:1时对制剂包封率的作用大小，结果见图1

图1磷脂与药物的质量比考察结果

由结果可知，磷脂与药物的比例对包封率作用明显，磷脂对药物的承载能力有限，如果生物碱A投药量太大，脂质囊材没有足够的空间来包封大量的药物，造成包封率降低，甚至导致药物析出；如果投药量太小，包封率高但是载药量小。而且脂药比为15:1制备的脂质体稳定性较差，放置10h即出现沉淀，因此将磷脂与药物的比例作为星点-响应面法优化工艺的因素之一继续考察。

磷脂与胆固醇的质量比考察

固定上述条件不变,比较磷脂（W1）与胆固醇(W3)的质量比为2:1、5:1、10:1、15:1、20:1、25:1时对包封率的作用大小，结果见图2。

图2磷脂/胆固醇考察结果

由结果可知，磷脂/胆固醇对包封率作用非常明显，随着胆固醇比例的减小，包封率呈现先增大后减小的趋势，在膜材比为10:1时达到大至。可能是由于胆固醇可以调节磷脂的流动性，稳定脂质双分子膜，但其所占比例过大时，其在脂质双层膜中占据一定的空间，干扰脂质囊泡的形成，导致包封率下降。因此,选择合适的磷脂/胆固醇,对脂质体载药量以及脂质体的稳定性都有重要的影响，将磷脂/胆固醇作为星点响应面法优化工艺的因素之一继续考察。

磷脂与VE的质量比考察

固定上述条件不变,比较磷脂(W1)与VE(W4)的质量比为2:1、5:1、10:1、15:1、20:1、25:1时对包封率的作用大小，结果见图3。

图3磷脂与VE的质量比考察结果

由结果可知，磷脂与VE比例为15:1时，包封率可高达。VE虽具有抗氧化功能，可以减少磷脂的氧化和有毒物质的产生，增强脂质体膜的稳定性，因此需要VE比例越高，抗氧化能力越强，但是如果其比例过大，就会似胆固醇一样占据脂质双层膜的空间，导致包封率明显减小。为了尽可能减小磷脂的氧化，提高脂质体的稳定性而不影响包封率，选择磷脂与VE比例为15:1。2.2.7磷脂浓度考察固定上述条件不变,比较磷脂浓度为10、20、30、40、50mg·mL-1时对包封率的作用大小，结果见图4。

图4磷脂浓度对脂质体包封率的影响

由结果可知，随着磷脂浓度的增加脂质体的包封率先增大后减小。磷脂浓度太低则包封药物的能力较弱，但磷脂浓度50mg·mL-1时，包封率明显减小，而且脂质体浓度太高，容易发生聚集，稳定性降低。磷脂浓度对包封率影响显著，因此将其作为星点-响应面法优化工艺的因素之一继续考察。

第二部分制备工艺优化过程将在下文中继续介绍。

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