心肌梗死（又称心肌梗塞、心梗）是指急性、持续性缺血、缺氧( 冠状动脉功能不全) 所引起的心肌坏死。发生心肌梗死后果较为严重, 在较短的时间内恢复心肌血液供给是抢救濒临死亡心肌的有效方法。近年来有研究表明, 阿托伐他汀钙能够保护心肌缺血注过程中的损伤, 减少心室重塑, 改善心功能。纳米脂质体是一种新型胶体给药系统, 增加药物溶解度, 提高药物靶向性, 延缓药物释放, 减少药物用量毒性等优点。本研究以阿托伐他汀钙为模型药制备阿托伐他汀钙纳米脂质体, 对大鼠心脏缺血损伤的保护作用。
本文将介绍“热熔乳化-高压均质技术-脂质体挤出技术”制备阿托伐他汀钙纳米脂质体的工艺流程, 评价产物的粒径分布和包封率, 通过中心复合设计-效应面法优化阿托伐他汀钙纳米脂质体处方, 并评价纳米脂质体的表面形态、粒径分布、Zeta 电位、体外释药。考察阿托伐他汀钙纳米脂质体的保护作用。
仪器与材料
LC-10AD 高效液相色谱仪 ( 日本岛津株式会社) ;
NanoGenizer 20K 高压均质机（苏州微流纳米生物技术有限公司）；
Nicomp 380 激光粒度测定仪( 苏州微流纳米生物技术有限公司) ;
Genizer Extruder在线脂质体挤出器（苏州微流纳米生物技术有限公司）
JEM-1200EX 型透射电子显微镜( 日本电子公司) ;
FA1004N 电子分析天平( 河南兄弟仪器设备有限公司) ;
TGL-16G 型台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；
阿托伐他汀钙原料药; 山嵛酸甘油酯; 油酸聚乙二醇甘油酯; 大豆卵磷脂。
方法与结果
热熔乳化-高压均质技术制备阿托伐他汀钙纳米脂质体：
①将处方量的大豆磷脂和泊洛沙姆 188 置于锥形瓶中, 加蒸馏水 40 ml 在75 ℃ 恒温水浴, 磁力搅拌速度1500 r每min使其完全溶解, 得到水相;
②将处方量的单硬脂酸甘油酯、油酸聚乙二醇甘油酯和阿托伐他汀钙置于锥形瓶中, 在 75 ℃ 恒温水浴, 磁力搅拌速度1500 r每min使其完全溶解, 得到油相;
③在高速剪切分散机搅拌下( 10000 r每min) , 将含药油相缓慢加入到水相中, 持续剪切乳化 10 min, 制得初乳;
④将初乳在 200 MPa 压力下, 通过NanoGenizer 20K高压均质机均质 4 次, 用蒸馏水稀释定容至全量, 冷至室温, 通过Genizer Extruder在线脂质体挤出器100nm膜， 即制备成阿托伐他汀钙纳米结构脂质载体。
图1. 阿托伐他汀钙纳米结构脂质载体的粒径分布
图2. 阿托伐他汀钙纳米结构脂质载体的Zeta电位
取阿托伐他汀钙纳米脂质体经蒸馏水稀释后, 采用nicomp380 激光粒度测定仪测定其粒径分布和 Zeta电位。阿托伐他汀钙纳米脂质体的粒径呈单峰成分布, 平均粒径为( 122.6 ± 39.7) nm, Zeta 电位为(-26.4 ± 3.7) m V.纳米粒表面通常带有负电荷, , Zeta 绝对电位值较高越有利于体系的稳定。 本研究制备的阿托伐他汀钙纳米脂质体Zeta 绝对电位值较高, 这可能是由于分子极化作用和乳化剂分子对水中电荷的吸附作用, 形成了类似于离子型的双电层结构而产生较高的 Zeta 电位值。同时, 体系中加入油酸聚乙二醇甘油酯中聚乙二醇长链的存在会阻碍纳米粒的聚集, 与静电斥力共同作用达到稳定体系的目的。本研究通过大鼠心肌缺血/再灌注实验结果证明, 将阿托伐他汀钙制备成纳米结构脂质载体后可显著提高阿托伐他汀钙对大鼠心肌缺血损伤的保护作用。
