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Genizer脂质体挤出仪助力复合抗肿瘤药物递送研究见刊Journal of Materials Chemistry B

作者:www.willnano.com 日期:2022-06-19 点击:179
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Genizer脂质体挤出仪助力“A hybrid membrane coating nanodrug system against gastric cancer via the VEGFR2/STAT3 signaling pathway”的研究文章见刊于Journal of Materials Chemistry B,作者单位为湖南大学。Genizer脂质体挤出仪应用于嵌合膜以及脂质体制备与粒径控制过程。


 图 Genizer脂质体挤出仪助力研究见刊Journal of Materials Chemistry B

图 Genizer脂质体挤出仪助力研究见刊Journal of Materials Chemistry B

 

虽然药物组合已被证明是临床胃癌治疗的有效策略,但由于药物溶解度低、无靶向性,如何进一步提高其生物利用度并减少副作用仍是一个挑战。最近,新兴的纳米技术为构建具有高靶向能力和溶解度的新药物递送系统提供了替代方案。在本研究中,负载有阿帕替尼 (AP) 和华蟾素 (CS-1) 的pH 响应脂质体 (Liposome-PEO, LP) 在嵌合混合膜 (R/C) 后用于胃癌的联合治疗。结果表明,构建的纳米复合物LP-R/C@AC不仅在体外通过诱导细胞凋亡、自噬和细胞炎性坏死等作用有效杀死肿瘤细胞,还通过 VEGFR2/STAT3 通路显着抑制肿瘤侵袭和转移。此外,与单一药物相比,它在胃癌小鼠模型中显示出更强的抗肿瘤活性。一种天然衍生的混合细胞膜递送包裹体系赋予纳米复合物以增强的生物界面,包括延长循环时间和靶向能力。


 图 LP-R/C@AC 纳米复合体抗肿瘤机制示意图

图 LP-R/C@AC 纳米复合体抗肿瘤机制示意图

 

红细胞膜、HGC-27膜和杂交膜的制备过程:

红细胞膜是根据我们之前建立的方案制备的:将BALB/c小鼠采集的新鲜全血(约2mL)悬浮于5 mL含肝素的PBS溶液中,4 ℃,3500rpm离心10 min,弃上清。然后,在沉淀物中加入10 mL低渗溶液,在4 ℃下孵育2h。然后,将红细胞裂解液在4 ℃,12 000 rpm下离心10 min,用4 ℃预冷PBS重新悬浮,直到上清液变成无色。通过离心获得的红细胞膜(RBC)在80 ℃冷藏以供进一步使用。

HGC-27细胞膜按照细胞膜蛋白和细胞质蛋白提取试剂盒(中国Beyotime)的说明制备。简而言之,将培养的HGC-27细胞用预冷PBS洗涤后从培养皿中刮下,1000rpm离心5 min。将获得的细胞碎片按上述方法进行处理。然后,在细胞碎片中加入含有蛋白酶抑制剂的膜蛋白提取试剂A,并在冰上孵育15 min。冻融、超声处理3次循环后,以800rpm离心10 min,收集上清液。最后,从上清液中以13 000 rpm离心30 min,得到所得到的癌细胞膜沉淀物(CCM)。

采用BCA蛋白检测试剂盒(Solarbio,中国)定量HGC-27和红细胞膜的蛋白浓度。两种HGC-27和RBC膜与相同的蛋白量混合。然后通过超声处理在37 ℃(50w/5min)下搅拌3小时,制备混合膜(R/C)。最后,产品通过脂质体挤出器(Genizer LLC,美国)进行挤压,以获得均匀的颗粒。

 

LP-R/C@AC NPs的制备过程

根据之前的研究,我们合成了基于脂质体纳米颗粒(脂质体-peo-AP-CS-1,LP@AC)的pH响应性纳米药物复合物。17将卵磷脂、胆固醇、DSPEPEOz、AP和CS-1(摩尔比为2:1:0.4:2:0.006–0.05)溶解在3 mL的氯仿中。超声处理5 min后,转移到圆底瓶中,在低压下蒸发氯仿。用3 mL PBS和在旋转条件下乳化1小时。对脂质体-peo-AP-CS-1(LP@AC)产品进行超声处理,然后通过具有不同孔径过滤器的脂质体手动挤出器(GenizerLLC,USA)进行挤压处理。然后,将LP@AC与磷脂比例的混合膜(R/C)混合,在37 1C下搅拌3h。通过手挤出机挤出后,得到的均匀的LP-R/C@ACNPs用于后续实验(用类似的方法合成含有AP或CS-1的纳米药物复合物)。

 

 图 脂质体挤出仪挤出后样品粒径、zeta电位等结果

图 脂质体挤出仪挤出后样品粒径、zeta电位等结果

 

图 抗肿瘤测试体内实验结果

图 抗肿瘤测试in vivo实验结果


 图 Genizer脂质体挤出仪应用于杂交仿生膜制备

图 Genizer脂质体挤出仪应用于杂交仿生膜制备


 图 Genizer脂质体挤出仪常见类型

Genizer脂质体挤出仪常见类型

 

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