程喜树碱(hydroxycamptothecin,1)属细胞毒类抗肿瘤药,可选择性抑制拓扑异构酶r,具有活性高､抗瘤谱广等特点｡溶性较差,早期临床使用时是通过内醋开环形成水溶性铀盐而达到临床治疗浓度.但疗效降低,且会导致严重的不良反应,如臼细胞和血小板减少及出血性小肠结肠炎等｡因此寻找有效的药物传递系统弥补药物自身缺陷就显得尤为重要｡脂质体具有增加药物溶解度､保护药物活性结构､延长血浆滞留时间及减轻毒性等诸多优点,引起人们的广泛关注｡目前,脂质体制备的常用方法主要有薄膜分散法､反相蒸发法､注入法､挤出法和主动载药法等｡其中,海剂注入法工艺过程简单､重现性好､样品内在质量稳定,己日渐成为脂质体工业生产的工艺之一｡本研 究采用溶剂注入法制备1脂质体,并以市售1注射剂为对照进行了Beagle犬体内的药动学研究,为其临床应用提供帮助｡

仪器与材料

PSS激光粒度仪;LC-2010C型高效液柑色谱仪;微射流高压均质机;FreeZone6L型冷冻干燥机;QuattroMicro型液柑色谱-质i普联用仪;Milli-QGradient纯水器;SpeedVac2010型离心浓缩系统｡

原药､注射用大豆磷脂;1对照品(纯度99.8%)､喜树碱;胆固醇;透析袋,甲醇､乙腊为色谱纯,其余试剂均为市售分析纯｡

实验过程

1.精密称取1250mg､大豆磷脂12.5g和胆固醇1.875g溶于适量无水乙醇中,置旋转蒸发仪中干燥成膜后,40"C加入适量无水乙醇洗膜,将所得类脂溶液匀速注入4"C的磷酸盐缓冲液(pH4.5)中,4"C搅拌15min后转至透析袋中,置蒸馆水1.5L中透析,每1h换水→次,6h后将透析袋中乳白色的脂质体混悬液取出,置高压均质机中,采用800ba压力循环5次,使PSS激光粒度仪测试粒径达到要求,经冻干制成脂质体冻干粉｡

2.分别采用0.9%氯化饷注射液和5%葡萄糖注射液重建1脂质体,取复溶后样品于-170"C快速冷冻制样,并于低温下观察载药脂质体｡同时,两种复溶样品经蒸馆水适当稀释后于25"C测定粒径和4电位｡

3.取5%葡萄糖注射液复溶重建后的1脂质体0.5ml,置截留分子量为10000的滤管中,离心(2260xg)10min,取滤液测定游离药物量｡另取上述1脂质体溶液0.5m],加入适量甲醇破乳后用流动相稀释至适宜浓度进行分析,计算脂质体中药物总含量｡色谱条件为色谱柱DiamonsilCI柱(4.6mmX250mm,5μm);流动相甲醇·水(60:40);检测波长266nm;柱温30"C;流速1.0ml/min;进样量20μl｡在上述色谱条件下,1的保留时间约为6.4min,其它成分对测定无干扰｡

结果

PSS激光粒度仪测得1属水不洛､脂难溶性药物,在水中的溶解度仅为3.9μg/ml,且表现油水分配系数亦较小(logPoc产1.06),故采用常规珞剂注入法制备时,脂质体包封率较低｡有研究表明,1可与磷脂形成复合物,发生复合反应后1与磷脂极性端的定向结合可使两为药效学及毒理学研究提供参考依据｡