特比萘芬是广谱抗真菌的新一代丙烯胺类药物,为白色或类白色结晶性粉末,难溶于水,可溶于有机溶剂,具有杀菌和抑菌双重作用｡特比萘芬对临床常见的真菌具有较强抑制作用,且体内无蓄积,副反应低｡丁香酚是很多中草药如丁香､肉桂中的有效成分,几乎不溶于水,与乙醇､乙醚及油等可混溶,是一种良好的植物源药物,具有较强的抑制真菌､细菌和杀除螨虫等作用｡红霉素毒性低,但刺激性强,犬､猫内服可引起呕吐､腹痛､腹泻等症状｡纳米乳是由油相､水相､表面活性剂及助表面活性剂,以适当比例混合而成的一种透明或半透明､低黏度的动力学和热力学稳定体系,其粒径一般为1~100nm｡大量资料表明,纳米乳具有制备简单､安全性高､热力学稳定､缓释､靶向及提高药物生物利用度､增大难溶性药物溶解度､增强易水解药物稳定性等优点｡

仪器与材料

JEM-1230型透射电子显微镜;PSS激光粒度仪;

DS224S电子天平;TGL 16B型台式高速离心机;

Waters 600E高效液相色谱仪;

UV-2450紫外-可见分光光度计;

AS-3120声仪;

pHS-3C型实验室pH计等;

特比萘芬;

丁香酚;

红霉素;

肉豆蔻酸异丙酯;

液体石蜡;

橄榄油;

吐温-80;

无水乙醇等｡

实验过程

1.复方特比萘芬纳米乳的形态观察及PSS激光粒度仪测粒径

取复方特比萘芬纳米乳适量,稀释5倍后分成2份,1份滴加在覆盖碳膜的铜网上,用质量分数2.0%的磷钨酸负染30s,自然挥干,在透射电镜下观察纳米乳的形态;另1份用激光粒度分析仪测定其平均粒径和多分散系数｡

2.复方特比萘芬纳米乳中有效成分含量测定方法的建立

采用PSS激光粒度仪测定复方特比萘芬纳米乳中的特比萘芬､丁香酚和红霉素含量,进样重复性和精密度试验｡

①重复性｡选取回收率试验中的1个待测样品,进行重复性试验｡

②精密度｡精密吸取)配制的2.4,4.8,6.4mg/mL的红霉素对照品溶液,色谱条件进行测定,记录峰面积并计算峰面积的RSD｡

结果

在透射电镜下,复方特比萘芬纳米乳乳滴呈圆球形,分布均匀,无粘连,分散性良好｡复方特比萘芬纳米乳的由PSS激光粒度仪测得的平均粒径(Z-Average)为11.9nm,多分散系数(PDI)为0.06,其中粒径小于20nm的乳滴占95.3%,可见其粒径分布范围较窄,粒径大小均一｡

讨论

复方特比萘芬纳米乳为水包油型,是澄清透明的淡黄色液体,PSS激光粒度仪测得的乳滴平均粒径为11.9nm,呈圆球形,分布均匀｡所建立的测定复方特比萘芬纳米乳3种有效成分的HPLC法准确可靠｡复方特比萘芬纳米乳制备工艺简单,重复性良好,性质稳定,使用方便并质量可控,便于工业化生产,有望为宠物临床提供一种高效､安全的复方纳米药物｡